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頂空氣相色譜系列講座(18)
點(diǎn)擊次數(shù):2932 更新時間:2015-09-01

頂空氣相色譜系列講座(18)  

人體血液中一氧化碳的分析——分光光度法定量5





三、分光光度法

1、紫外光譜法原理

CO中毒血中可能含有三種血紅蛋白: ⑴碳氧血紅蛋白(HbCO)——與CO結(jié)合的Hb; ⑵ 氧合血紅蛋白——與O2結(jié)合的Hb  ⑶血紅蛋白——沒結(jié)合的Hb。 它們在500nm~600nm范圍內(nèi)吸收光譜見圖-2。碳氧血紅蛋白zui大吸收峰分別在568.2nm和538nm;氧合血紅蛋白zui大吸收峰分別在576.2nm和542nm;血紅蛋白zui大吸收峰在555nm。如血液含三種形式的血紅蛋白(其中的微量高鐵血紅蛋白可忽略不計),則其光譜呈現(xiàn)三種光譜的混合形。如在血液中加入還原劑(連二亞硫酸鈉或硫化銨)溶液,則可將氧合血紅蛋白及高鐵血紅蛋白還原為血紅蛋白,而碳氧血紅蛋白不被還原,因而血液中只存在碳氧血紅蛋白和血紅蛋白兩種不同的形式,它們的吸收光譜見圖-1





用分光光度法測定血中HbCO定性和定量是基于HbCO和對光譜的特征吸收不同,和特征吸收與濃度有量的關(guān)系。HbO2在589nm~577nm和556nm~536nm區(qū)間有兩條吸收譜帶,其zui大吸收是579nm和542nm。HbCO在579nm~564nm和548nm~530nm區(qū)間有兩條吸收譜帶,其中zui大吸收是572nm和539nm。加入還原劑后檢血中HbO2和高鐵血紅蛋白被還原為血紅蛋白(Hb),此時吸收譜帶變?yōu)橐粭l,即在530nm~580nm之間,zui大吸收為556nm。而HbCOzui大吸收波長仍是572nm和539nm不變。

2、具體操作步驟

取CO中毒心血(檢材血)0.1ml~0.3ml,加10ml 0.1%硫化銨或多硫化銨水溶液(內(nèi)含連二亞硫酸鈉2.5mg/ml)稀釋混勻,測定500nm~600nm之間的吸收圖譜,用切線法量取555nm和540nm處的吸收值見圖-2,計算血中HbCO% = F ×(A540/B555)×100公式,式中F為常數(shù)1.5;A540見圖-2中a~b(cm)線段長;B555見圖-2中c~d(cm)線段長。此法適合檢材血中含量HbCO% > 40% 時效果好,此方法在辦案中使用較多。

3、另一種經(jīng)驗方法

    適合各種CO濃度檢材血的HbCO%測定,用0.4%氨水溶液稀釋的含CO血在529nm和582nm處有吸收峰,稀釋液做參比。根據(jù)經(jīng)驗公式:HbCO% = (A529-A582)×185/(A529-0.07)進(jìn)行計算。185和0.07均為經(jīng)驗常數(shù),本方法要求稀釋檢材血的吸光度值在0.4~0.6范圍準(zhǔn)確度高。

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